費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌菌種程序，通常分為母種、原種和栽培種3個(gè)層次，也就是通常所說(shuō)的一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)菌種。其中母種的分離選育技術(shù)性強(qiáng)，要求精化；而原種和栽培種的制作則相對(duì)比較簡(jiǎn)單。下面介紹各級(jí)菌種的制作技術(shù)。

母種的分離選育方法是：母種主要采用人工選擇、誘變育種、雜交育種和原生質(zhì)融合等手段獲得。作為一般制種專業(yè)戶，可以采用人工選擇方式分離培育母種，具體步驟與操作方法如下。

1.采集種源。費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌從野生或人工栽培群體中選擇有代表性的優(yōu)良菇體作為種源。①種菇選擇時(shí)間。一般在11月上中旬，在*批和第二批菇中挑選。因?yàn)檫@段時(shí)間蘑菇生長(zhǎng)正是旺盛時(shí)期，菌絲生活力強(qiáng)，子實(shí)體健壯，質(zhì)量好，加之氣溫適宜，蘑菇能正常成熟。②種菇的標(biāo)準(zhǔn)是：八成熟，朵形圓正，肉質(zhì)肥厚，顏色潔白，無(wú)病蟲害。采集一二朵符合上述標(biāo)準(zhǔn)的種菇編上號(hào)碼，作為分離母種的材料。從栽培室采集的應(yīng)標(biāo)有原菌株代號(hào)。

2.培養(yǎng)基配制。瓊脂培養(yǎng)基又叫PDA培養(yǎng)基，常用配方為：馬鈴薯200克、瓊脂16～18克、葡萄糖20克、水1000毫升。先將馬鈴薯洗凈去皮，切成薄片，置于鋁鍋內(nèi)加水煮沸15～30分鐘至薯塊酥而不爛為止。煮后用6～8層事先浸濕擰干的紗布過(guò)濾，過(guò)濾后加入瓊脂16～18克（氣溫低時(shí)加16克，氣溫高時(shí)加18克）再煮，并不斷攪拌，使固體瓊脂*溶化，再用4～6層紗布過(guò)濾。將濾液加水至1000毫升加入20克葡萄糖，攪拌溶化趁熱分裝試管。裝入量為試管高度的1/4～1/5，注意培養(yǎng)基不要粘著試管口，管口用棉塞塞緊，或?qū)⒅貉b入玻璃三角瓶?jī)?nèi)，每瓶裝量為20毫升。然后置于高壓鍋內(nèi)，在壓力達(dá)108千帕，鍋內(nèi)溫度為121℃滅菌30分鐘左右。滅菌后及時(shí)取出，趁熱將試管斜排于桌上，費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌冷卻后即成為固體斜面培養(yǎng)基。