傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶?jī)?nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí)，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過(guò)度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

NCI-H1915人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無(wú)菌，且須在無(wú)菌超凈工作臺(tái)中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長(zhǎng)。來(lái)源于不同動(dòng)物種類、組織類型的細(xì)胞，對(duì)培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對(duì)于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)起著關(guān)鍵作用?？筛鶕?jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過(guò)短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過(guò)小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過(guò)大對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴螅瑧?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過(guò)程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

GMP Synthase： 谷酰胺轉(zhuǎn)移酶GMPS抗體 大鼠腦膜細(xì)胞RMC

PC-3M細(xì)胞，人前列腺癌細(xì)胞 兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞,CCC-SMC-2細(xì)胞 人真皮成纖維母細(xì)胞-HDF-a 人脫氧膠原交聯(lián)(DPD)ELISA 試劑盒 IgM/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗人IgM 0.1ml

GMPPB： GDP甘露糖焦0酸化酶B抗體 EML2 Others Human 人 EML2 / TLT2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

CM-M004小鼠氣管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL 人脫氧核糖酶Ⅰ(DNase-Ⅰ)ELISA 試劑盒 IgM/Cy7 Cy7標(biāo)記的兔抗人IgM 0.1ml

GPBAR1： G蛋白偶聯(lián)膽汁酸受體1 0.2ml

Nox1： 有絲分裂氧化酶1抗體 SGK3 Others Human 人 SGK3 / SGKL 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

(含100mL 酶解緩沖液) 10mL 大鼠Ⅹ(FⅩ)ELISA 試劑盒 p53(Mouse p53/tumor protein)  小鼠p53 96T

NADPH oxidase 3： NADPH oxidase 3抗體 22RV1細(xì)胞，前列腺癌細(xì)胞 人肝癌細(xì)胞,Bel-7405細(xì)胞 CL-0024Anglne(人卵巢癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

HA Others H4N8 甲型流感 H4N8 (A/chicken/Alabama/1/1975) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 大鼠Ⅹ(F10)ELISA試劑盒 cGMP(Mouse Cyclic guanosine monophosphate)  小鼠環(huán)0酸鳥苷 96T

NADPH oxidase 4： NADPH氧化酶NOX家族的成員4抗體 小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

NCI-H1915人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞CXCL16 Others Rat 大鼠 CXCL16 / SR-PSOX 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 牛支原體ELISA試劑盒 PAP2c (Phosphatidic acid phosphatase 2c) 0脂酸0酸酶2C(抗原) 0.5mg

phospho-c-Jun(Thr93)： 0酸化原癌基因c-Jun抗體 小鼠漿細(xì)胞瘤;MPC-11

L929細(xì)胞，小鼠肺成纖維細(xì)胞 SGC7901(胃腺癌細(xì)胞) 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞;C6 牛載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA 試劑盒 PEPT1 (Peptide-transporters 1) 腸道肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(小肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白)多肽 0.5mg

JAK2： 蛋白質(zhì)酪酸激酶JAK2抗體 ICAM1 Others Mouse 小鼠 ICAM-1 / CD54 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人腎系膜細(xì)胞cDNAHRMC cDNA 牛孕激素/(PROG)ELISA 試劑盒 PTEN/MMAC1 一種抑制基因抗原 0.5mg