傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長密度，當(dāng)細(xì)胞生長密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶內(nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí)，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

NCI-H69人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長滿至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無菌，且須在無菌超凈工作臺中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長。來源于不同動(dòng)物種類、組織類型的細(xì)胞，對培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長起著關(guān)鍵作用。可根據(jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過長導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過大對細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴?，?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

FGFBP2： 纖維細(xì)胞生長因子結(jié)合蛋白2抗體 人腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HIMEC)( 5×105 )

人骨肉瘤細(xì)胞;U-2 OS [U2OS;U2-OS;U-2OS] 小鼠Smad同源物7(Smad7)ELISA試劑盒 Sidekick 1： 細(xì)胞粘附分子伴侶蛋白1抗體 人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤;U-87 MG [U87MG;U87 MG] 大鼠軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL

EGF Others Mouse 小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 小鼠Smad同源物3(Smad3)ELISA試劑盒 Sidekick 2： 細(xì)胞粘附分子伴侶蛋白2抗體 Asp2人胚胎腎細(xì)胞轉(zhuǎn)化細(xì)胞;FC33

NP69-SV40T細(xì)胞，永生化鼻咽上皮細(xì)胞系 小鼠細(xì)胞,C127細(xì)胞 非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS2;Vero-HCV-NS2 小鼠Smad同源物2(Smad2)ELISA試劑盒 SIGLEC11： 唾液酸結(jié)合性樣凝集素11抗體 PRSS3 Others Human 人 ypsin-3 / PRSS3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

軟骨細(xì)胞生長添加物CGS 小鼠Smad同源物1(Smad1)ELISA試劑盒 SIGLEC14： 唾液酸結(jié)合性樣凝集素14抗體 EL4.IL-2 小鼠淋巴瘤細(xì)胞

IGFBP4 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IGFBP4 蛋白 (His 標(biāo)簽) 大鼠載脂蛋白B100(Apo B100)ELISA試劑盒 IL-10 (Rabbit Interleukin 10)  兔白介素10 96T

Phospho-LRP6(Thr1479)： 0酸化低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6抗體 CSK Others Mouse 小鼠 CSK / C-Src kinase 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

大鼠膀胱上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠載脂蛋白B(APOB)ELISA試劑盒 TPO(Rat Thrombopoietin,TPO ) 大鼠血小板生成素 96T

phospho-LCK(Tyr394)： 0酸化淋巴細(xì)胞特異性蛋白酪酸激酶抗體 WM451, 人黑色素瘤細(xì)胞 導(dǎo)管瘤細(xì)胞,BT474細(xì)胞 VERO(非洲綠猴腎細(xì)胞)

ERP27 Others Human 人 ERP27 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 大鼠載脂蛋白B(apo-B)ELISA 試劑盒 Mouse pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP  小鼠垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽 96T

NCI-H69人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞H4-IIE(大鼠肝癌細(xì)胞 ) 5×106cells/瓶×2 CL-0337FO(小鼠骨髓瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 新生牛眼晶體上皮細(xì)胞;NBLE 人抗利尿激素/血管加壓素/精酸加壓素(ADH/VP/AVP)ELISA 試劑盒 M2-PK ( pyruvate Kinase M2) 酸激酶-M2(抗原) 0.5mg

Phospho-HDAC5 (Ser259)： 0酸化組蛋白去乙?；?span>5抗體 人前脂肪細(xì)胞-內(nèi)臟RNAHPA-v miRNA5 μg

RS1(大鼠皮膚成纖維樣細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人抗類固醇細(xì)胞抗體(SCA)ELISA 試劑盒 M2-PK ( pyruvate Kinase M2 ) 酸激酶-M2(抗原) 0.5mg

phospho-HDAC1 (Ser423+Ser421)： 0酸化組蛋白去乙?；?span>1抗體 CSF1 Others Mouse 小鼠 M-CSF / CSF-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

SHG-44人膠質(zhì)瘤細(xì)胞 Human glioma cell line SHG-44 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS 人抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎核抗原抗體(RANA)ELISA 試劑盒 p-Arhgef2/GEF-H1(Rho guanine nucleotide exchange factor 2,pSer810) 0酸化Rho鳥苷酸交換因子2抗原 0.5mg